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国家商检局


国家商检局关于对日出口冻鸡二氯二甲吡啶酚检验的通知

　　　　　　　　　　　 （一九九一年一月二十四日）

　

　　经多次反复验证已完成对日出口冻鸡二氯二甲吡啶酚的检验方法。现印发给你们，请按此方法检验放行出口。

　　检验取样：按１９９０年１１月１５日北京外贸、商检紧急会议商定的办法进行取样，即以生产日作批，每批不得少于一个样品，每个样品由相当于５－１０只鸡的不同部位的肉组成。

　　在恢复出口检验时：（一）对一九九０年十二月底前生产的库存产品，暂不检验出口；（二）对出口货源要做到心中有数，在加强对养鸡场饲养用药、停药期的监督管理的基础上，对新加工生产的出口冻鸡肉经严格检验，合格后放行出口。

　　关于今年１－３月份日本厚生省重点监测的药残，望各局加紧方式验证，争取早日实施出口检验。

　

附件：　　　　　 鸡肉组织中二氯二甲吡淀酚残留量测定方法

　

　　１．适用范围

　　本方法适用于鸡肉组织中二氯二甲吡淀酚残留量的测定

　　２．方法原理

　　用甲醇提取鸡肉组织中的二氯二甲吡淀酚，提取液过滤后，经氧化铝、阴离子交换柱净化。洗脱液用重氮甲烷甲基化，生成的二氯二甲吡淀甲醚（３．５－二氯４－甲氧基－２．６－二甲基吡淀）用电子捕获气相色谱法测定。与标准比较，求出其含量。适用浓度为：鸡肉中０．０１ｐｐｍ以上。

　　３．试剂

　　３．１　甲醇：优级纯

　　３．２　苯：分析纯（重蒸馏）

　　３．３　１Ｎ　ＮａＯＨ水溶液

　　３．４　２．４－二硝基氯苯（内标物）：优级纯

　　３．５　提取用苯：浓度为０．０５ｇ／ｍｌ的２．４－二硝基氯苯的苯溶液。

　　３．６　助滤剂：用甲醇清洗，风干。

　　３．７　氧化铝：层析用，中性，１００－２００目

　　３．８　阴离子交换树脂：Ｄａｗｅｘ１－Ｘ８１００－２００目ｃｌ型或等效品

　　３．９　５％醋酸甲醇溶液：将２５ｍｌ冰醋酸加到４７５ｍｌ甲醇中

　　３．１０　无水硫酸纳：分析纯６００℃灼烧４小时后置于干燥器中备用

　　３．１１　重氮甲烷溶液：将装有氢氧化钾水溶液（浓度：０．６ｇ／ｍｌ）１０ｍｌ，乙醇３５ｍｌ及乙醚１０ｍｌ的混合液的双口蒸馏瓶置于磁力搅拌器加热板上的水浴中，水温７０℃，将搅拌子放入瓶中，接上滴液漏斗和高效冷凝器，冷凝器后串连有两个１２５ｍｌ的烧瓶。在第二个烧瓶中放在１０ｍｌ乙醚，且入口应插到乙醚液面以下。在冰水浴中冷却进两个接收瓶。边用磁力搅拌器搅拌边从滴液漏斗中滴加Ｎ－甲基－Ｎ－硝基－Ｐ－甲苯磺胺乙醚溶液（２１．５ｇ／１４０ｍｌ），滴完全部溶液的时间控制在２０ｍｉｎ以上。当蒸馏液呈淡黄色时，停止蒸馏。将两个接收瓶中的液体合并，在７０℃水浴上再蒸馏，其蒸馏液作为重氮甲烷溶液。此液密闭置于冰箱中保存，保存期为一个月。

　　３．１２　二氯二甲吡淀酚标准溶液

　　３．１２．１　二氯二甲吡淀酚标准贮备液－１００ｕｇ／ｍｌ：精确称取二氯二甲吡淀酚分析用标准品１００ｍｇ，用磁力搅拌器搅拌溶解于甲醇（２－３小时），定容至１０００ｍｌ。

　　３．１２．２　中间标准溶液（Ⅰ）－１０ｕｇ／ｍｌ用移液管移取二氯二甲吡淀酚标准贮备液１０ｍｌ于１００ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

　　３．１２．３　中间标准溶液（Ⅱ）－１ｇ／ｍｌ用移液管移取中间标准溶液（Ⅰ）１０ｍｌ放入１００ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

　　３．１２．４　工作溶液－０．１ｕｇ／ｍｌ：用移液管移取中间标准液（Ⅱ）１０ｍｌ放入１００ｍｌ容量瓶入，用甲醇稀释至刻度。

　　４．仪器

　　４．１　均质器

　　４．２　试管：１３×１００ｍｍ旋盖式耐压性试管，盖内衬硅胶垫

　　４．３　离心管：１０×１００ｍｍ带盖

　　４．４　旋转蒸发器：带抽真空装置和恒温水浴锅

　　４．５　氧化铝柱：称取６ｇ氧化铝，装入内径为１０ｍｍ的层析柱内

　　４．６　阴离子交换柱：将阴离子交换树脂伴以去离子水装入内径１０ｍｍ的玻璃层析柱内，高度为１ｃｍ。注入１Ｎ　ＮａＯＨ水溶液１００ｍｌ洗柱，然后用去离子水洗至中性。流速２ｍｌ／ｍｉｎ，

　　注入０．５Ｍ　ＣＨＣＯＯＮａ水溶液１００ｍｌ洗柱，用去离子水洗至中性后（流速２ｍｌ／ｍｉｎ）注入８０％

　　甲醇５０ｍｌ。放出甲醇至液面，略高于树指层。

　　４．７　气相色谱仪带电子捕获检测器

　　４．７．１　色谱分析条件

　　４．７．１．１　温度：柱箱：１６０℃

　　　　　　　　　　　　　　　　进样品：２２０℃

　　　　　　　　　　　　　　　　检测器：２４０℃

　　４．７．１．２　载气：高纯氮，流速：６５ｍｌ／ｍｉｎ

　　４．７．２　色谱柱：玻璃柱３．２ｍｍ×２ｍ

　　固定相为２０％ＤＣ－２００涂于Ｇａｓ　Ｃｈｒｏｍ　Ｑ载体（６０－８０目）。使用前于２００℃活化２４小时以上。

　　５．操作方法

　　５．１　试样分析

　　５．１．１　提取

　　取经搅碎的鸡肉试样２０ｇ（精确至０．１ｇ）于均质杯中，加入甲醇５０ｍｌ和助滤剂３ｇ，高速均质３ｍｉｍ，在布氏漏斗上敷上２ｇ助滤剂。抽滤经均质的样液，用４０ｍｌ甲醇分２－３次洗涤均质杯并移入布氏漏斗中，将滤液并入１００ｍｌ溶量瓶中，用甲醇定容至刻度。

　　５．１．２　净化

　　用移液管移取上述滤液２０ｍｌ注入氧化铝柱并用１０ｍｌ甲醇冲洗，将流出液移入阴离子交换柱，以１ｍｌ／ｍｉｎ的速度流出，用１０ｍｌ甲醇冲洗柱内壁，弃去流出液。用２０ｍｌ５％醋酸的甲醇　分两次洗脱二氯二甲吡淀酚，以１ｍｌ／ｍｉｎ的速度流出，流出液接收于２５ｍｌ的溶量瓶内，用甲醇定容至刻度。

　　５．１．３　甲基化

　　用移液管移取上述洗脱液１ｍｌ于带旋盖的试管内，试管在旋转蒸发器上（水浴温度为５５℃）真空蒸干（可通微弱空气流）。取出试管加入０．２ｍｌ８０％，甲醇，微热使残渣溶解。冷至室温，加重氮甲烷溶液１ｍｌ拧紧旋盖使试管密封。于７０℃水浴中加热５－１０ｍｉｎ，加热时水浴液面应和反应液面相齐。取出试管冷却至室温，拧去旋盖，将试管固定在７０℃水浴中，仅使试管圆形底部接触水面，加热２－３分钟，缓缓地蒸除醚液。加入０．１ｍｌＮ　ＮａＯＨ溶液，５ｍｌ水和１．０ｍｌ提取用苯。盖好试管，用力摇动混合１ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ。

　　将上层苯液转移至另一干燥的离心管中，加少量无水硫酸纳，振摇１ｍｉｎ，离心１ｍｉｎ。

　　５．１．４　色谱测定

　　取上述离心的苯溶液４μｌ注入气相色谱仪。测出二氯二甲吡淀甲醚峰高与内

标峰高的比值，由标准曲线推算出苯提取液中二氯二甲吡淀酚的浓度μｇ／ｍｌ。

　　５．２　标准曲线的绘制

　　分别取二氯二甲吡淀酚测定用标准溶液０．１，０．２，０．４，０．８，１．０，２．０ｍｌ于试管中，以下按５、１、３进行甲基化（不加１Ｎ　ＮａＯＨ溶液），进样４μｌ进行色谱测定。根据所求得的色谱峰与内标峰的峰高比对应溶液的浓度μｇ／ｍｌ绘制标准曲线。

　　５．３　回收系数Ｒ

　　准确称取２０．０ｇ不含二氯二甲吡淀酚且经搅碎后的鸡肉组织，分别加入相当于０．０，０．１或０．５ｐｐｍ的二氯二甲吡淀酚中间标准溶液（Ⅱ）分别０．０，２．０或１０．０ｍｌ。按５．１操作且计算出平均回收系数：

　　　　由标准曲线查得的ｐｐｍ值

　　Ｒ＝－－－－－－－－－－－－

　　　　　　加入的ｐｐｍ值

　　５．４　结果计算

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．２５（Ｇ－Ｇ′）

　　动物组织中的二氯二甲吡淀酚ｐｐｍ＝－－－－－－－－－－式中：Ｇ＝由标

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｒ

准曲线查得样品中二氯二甲吡啶酚的ｇ／ｍｌ值；

　　Ｇ′＝由标准曲线查得空白中二氯二甲吡淀酚的ｇ／ｍｌ值。

　　Ｒ＝回收系数，６．２５＝换算系数

　　５．５　补充说明

　　５．５．１　若无内标物或内标峰受杂质峰影响时，可用苯提取二氯二甲吡淀甲醚，用外标法定量。

　　５．５．２　样液测定时，应穿插注入相近浓度经甲基化的标准溶液，以校正标准曲线。

　　５．５．３　每批阴离子交换树脂使用前，应先做其洗脱曲线，并根据情况适当调节树脂用量和洗脱液体积。

　　５．５．４　所用水为去离子水

　　５．５．５　所用容器首先用１：１监酸浸泡０．５ｈ然后用肥皂水洗涤，再用去离水冲净。